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铜蓝蛋白（Cp）含量测试盒（比色法）
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铜蓝蛋白(Ceruloplasmin，Cp)测定试剂盒说明书
微量法100T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白，有运输铜的功能，同时具有氧化酶的活性，是细胞外液重要的抗氧化剂。
测定原理:
铜蓝蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺生成蓝色产物，在645nm处有特征吸收峰，依此可得铜蓝蛋白活性。
自备实验用品及仪器:
天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体7mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。（使用前37℃预热）
样本前处理：
测定操作表:
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空白管 |
测定管 |
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样品（µL） |
30 |
30 |
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试剂一（µL） |
90 |
90 |
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试剂二（µL） |
60 |
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混匀，37℃预热5min |
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试剂三（µL） |
120 |
120 |
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混匀，37℃反应30min |
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试剂二（µL） |
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60 |
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混匀，25℃室温放置5min，取200µL于微量石英比色皿/96孔板中，测定645nm处吸光值。 ΔA=A测定-A空白。 |
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计算公式:
酶活定义:37℃条件下， 每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高0.01为一个酶活单位。
Cp活力（U/mL）=ΔA×V反总÷0.01÷V样÷T = 33.33×ΔA
单位定义：37℃条件下，每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。
Cp活力（U/g鲜重）=ΔA×V反总÷0.01÷（W×V样÷V样总）÷T = 33.33×ΔA÷W
单位定义：37℃条件下，每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.01为一个酶活单位。
Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反总÷0.01÷（Cpr×V样）÷T = 33.33×ΔA÷Cpr
V样：0.03 mL；V反总：0.3 mL；T：反应时间，30min；V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
酶活定义:37℃条件下， 每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高0.005为一个酶活单位。
Cp活力（U/mL）=ΔA×V反总÷0.005÷V样÷T = 66.66×ΔA
单位定义：37℃条件下，每分钟每克样品与底物作用吸光值升高0.005为一个酶活单位。
Cp活力（U/g鲜重）=ΔA×V反总÷0.005÷（W×V样÷V样总）÷T = 66.66×ΔA÷W
单位定义：37℃条件下，每分钟每毫克蛋白样品与底物作用吸光值升高0.005为一个酶活单位。
Cp活力（U/ mg prot）=ΔA×V反总÷0.005÷（Cpr×V样）÷T = 66.66×ΔA÷Cpr
V样：0.03 mL；V反总：0.3 mL；T：反应时间，30min；V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
注意事项:
试剂二和试剂三有一定的毒性和刺激性，请操作时做好防护措施。
产品说明书