半纤维素含量测试盒（比色法）

半纤维素（hemicellulose）含量试剂盒说明书

微量法  100管/96样

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

半纤维素是植物细胞壁中与纤维素紧密结合的多糖混合物，是构成细胞初生壁的主要成分，广泛存在于植物中，是一种新型可利用能源。

测定原理

半纤维素经酸处理后转化成还原糖，与DNS生成红棕色物质，在540nm有特征吸收峰，吸光值大反映了半纤维素含量。

需自备的仪器和用品、

天平、40目筛，恒温水浴锅、烘箱、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板

试剂组成和配制

试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。

样品处理

样品80℃烘干至恒重，粉碎，过40目筛。

测定操作表

	空白管	测定管
样本（g）		0.02
试剂一（μL）		1000
90℃水浴10min，25℃，8000g离心10min，弃上清
蒸馏水（μL）		1000
充分混匀，25℃，8000g离心10min，此步骤重复3次，取沉淀105℃，烘干至恒重
试剂二（μL）	200	200
90℃水浴1h，自然冷却
试剂三（μL）	200	200
混匀，25℃，8000g离心10min
上清（μL）	60	60
试剂四（μL）	45	45
蒸馏水（μL）	195	195
充分混匀，90℃水浴5min，自然冷却，25℃，8000g离心10min
取200μL上清液于微量石英比色皿/96孔板，测定540nm处吸光值A。分别记为A空白管和A测定管，ΔA=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。

计算公式

1. 用微量石英比色皿计算公式如下：

1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.3968x+0.0306，R2=0.9961；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

2、半纤维素含量（mg/g 干重）=（△A-0.0306）÷ 0.3968÷（W÷V样总）

                    = 1.01×（△A-0.0306）÷W

b．用96孔板计算公式如下：

1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.1984x+0.0306，R2=0.9961；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

2、半纤维素含量（mg/g 干重）=（△A-0.0306）÷ 0.1984÷（W÷V样总）

                    = 2.02×（△A-0.0306）÷W

W：样品质量，g；V样总：加入提取液体，0.4mL。

 

检测限为1mg/g。