ELISA实验检测ABA含量的具体方法2018-12-27

    基本上经常做实验的人都做过Elisa试验，因为Elisa试验操作容易，试剂出色，所以很多人都会选择做这个实验，也给人们带来了很大的帮助。很多时候人们都不知道ABA的含量，所以很多人就采用ELISA实验的方法检测ABA的含量，下面就来述说ELISA实验检测ABA含量的具体方法：

    先将ABA蛋白质复合物与固相载体（聚苯乙烯微量滴定板）结合，然后将待测的ABA（样品或标准品）和兔抗ABA抗体加入微量滴定板的孔中，进行竞争反应，接着弃去上清液，洗涤固相表面，加入酶标二抗使其与结合在固相ABA上的抗体反应，zui后去除多余的未反应的酶标二抗，测定与固相结合的酶活性，酶活性和待测ABA含量呈负函数关系，即固相ABA结合的抗体与酶标二抗量（OD或B%）随待测ABA含量增加而减少，以一系列已知浓度的ABA的OD值制图而获得标准竞争性抑制曲线，对于未知样品B,只要在同样条件下测定反应后的OD值，就可以从标准曲线上查到ABA的量。

    测定方法

    1.包被：在微量滴定板内准确加入100μLABA包被液，37℃湿盒过夜。

    2.标样稀释？：取8支试管每管加150μLDB，*管中加入50μL（2000ng/50μL）标准液，充分涡旋后，取50μL至第二号管中，同样涡旋后，取50μL到第三管；依次稀释到第六管，稀释后的标准ABA依次为1000ng、500ng、250ng、125ng、62.5ng、31.25ng、15.625ng、7.8125ng/50μL。

    3. 洗板：从37℃湿盒中取出滴定板，恢复到室温后，弃去包被液，用WB（洗涤缓冲液）洗涤三次，甩干（吸水纸）。

    4.加样：1～8孔对应加入ABA标样50μL，10号孔相应加入zui浓ABA标样，9号孔加50μLDB，三排重复；然后每孔加50μL抗体，37℃ 45分钟。

    5.洗板：

    6.加酶标二抗：每孔加100μL，37℃反应1小时。

    7.洗板：

    8.显色：各孔加10μLOPD显色液，37℃ 20分钟。

    9.终止反应：各孔加50μL 6NH2SO4。

    10.读数：490nm读取OD值。其中10号孔调零，而9号孔为zui大值（B0），1~8号孔的OD值为B。

    11.结果计算：以In（B/B0）∕（1－B/B0）为纵坐标，以标准ABA浓度的常用对数（lg［ABA］）为横坐标，绘制曲线。