ELISA试剂盒问题分析。2020-08-07

1.石蜡切片在染色过程中出现脱片现象
烤片时间不够，或温度不够，可以延长烤片时间和提高烤片温度；用含有多聚赖氨酸的玻片，可以购买到或这自己做；有些组织本身就容易掉片，如骨组织等，操作时冲PBS不要直接冲到组织上，冲到组织上方，让它流下冲洗组织；

2.边缘效应
组织边缘与玻片粘贴不牢，边缘组织松脱漂浮在液体中，每次清洗不易将组织下面试剂洗尽所致. 解决办法：制备优质的胶片（APES或多聚赖氨酸），切出尽量薄的组织切片，不厚于4微米，组织的前期处理应规范，尽量避免选用坏死较多的组织；切片上滴加的试剂未充分覆盖组织，边缘的试剂容易首先变干，浓度较中心组织高而致染色深。解决办法：试剂要充分覆盖组织，应超出组织边缘2mm。用组化笔画圈时，为了避免油剂的影响，画圈应距组织边缘3-4mm。

3.产生组织切片非特异性染色
抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条；一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看；DAB孵育时间过长或浓度过高；标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。
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