酶联接免疫吸附剂测定 ELISA( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。ELISA基本原理它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。
为了确保实验的准确性和重复性，ELISA试验需要遵循一系列操作原则。以下是一些关键操作原则：
1. 样本处理：
样本应尽可能澄清，避免浑浊，因为浑浊的样品可能会影响酶标仪读数和结果的准确性。
根据样本类型（如血清、血浆、尿液、细胞上清等）进行适当的处理，例如血清样本应在自然存放12小时后，以3000 rpm离心15分钟，血浆样本则需使用含抗凝剂的采血管，采血后立即混合并离心。
样本收集后应尽快检测，如需短期保存，可置于28°C，长期保存则需在20°C或更低温度下保存，避免反复冻融。
样本稀释时，应根据试剂盒推荐的稀释比例进行，以确保结果落在标准曲线的线性范围内。
2. 试剂准备：
所有试剂在使用前应平衡至室温，避免温差导致的非特异性反应。
配制缓冲液时，应使用去离子水或超纯水，并根据需要加入如磷酸盐、吐温20等成分，确保pH值和离子强度适宜。
自配的洗涤液应遵循说明书，避免使用叠氮钠等可能影响实验结果的成分。
标准品应按说明书要求溶解和稀释，形成浓度梯度。
3. 加样与孵育：
加样时应垂直悬空加入，避免产生气泡，确保每孔加样量准确。
孵育过程中，应根据试剂盒要求的温度（如37°C）和时间进行，某些步骤可能需要震荡以促进反应。
两次孵育之间，尤其是加酶结合物后，需要彻底洗板，以去除未结合的物质。
4. 显色与终止：
显色剂通常在临用前配制，避免光敏感底物的暴露，确保反应在避光条件下进行。
终止液的加入应避免产生气泡，以防止影响读数的准确性。<cite>5</cite>
显色时间应根据说明书推荐，过长或过短都可能影响结果。
5. 读数与数据分析：
使用酶标仪读取OD值时，应选择合适的波长（如450 nm），并考虑参考波长（如630 nm）以减少背景干扰。
根据标准曲线，通过四参数曲线拟合计算样本浓度，确保结果的准确性。
6. 安全与防护：
实验中使用的底物和终止液可能具有潜在危害，操作时应佩戴个人防护装备，如手套、护目镜和实验服。
实验产生的废液需按照规定进行处理，避免环境污染。
7. 质量控制：
每次实验应包括空白对照、阳性对照和阴性对照，以监控实验的特异性和灵敏度。
室内质控和室间质评是保证检测质量的重要措施，应定期进行。
8. 结果记录与保存：
实验数据应详细记录，包括样本信息、操作步骤、仪器参数等，以便于结果的追溯和分析。
结果应保存在安全的电子或纸质档案中，以备后续分析或审核。
遵循这些操作规范，可以确保ELISA实验的准确性和重复性，从而获得可靠的数据。
