什么是抗体蛋白测序？2018-11-26

抗体蛋白测序是简单地定义未知抗体的氨基酸序列。质谱技术在抗体蛋白重新测序中的应用使得在没有可用细胞系或事先不知道DNA序列的情况下进行这项工作成为可能。

蛋白质分子的质谱测量是测序技术的基础。只需要0.2毫克的蛋白质。分析和报告之间的时间缩短到了几周。详细报告包括重链和轻链序列、支持报告序列的相关数据以及对蛋白质分子的其他评论。

如果产生特定抗体的杂交瘤丢失或不可用，抗体本身仍可通过重组再生，仅使用0.2 mg单克隆抗体蛋白。如果连这一点都没有，其他的办法也可能。

使用高分辨率质谱技术和优化的设置，以及用于抗体重新测序的专有软件，意味着整个蛋白质可以从n项到c项测序，包括每个氨基酸。

由于在分离肽的多个质谱读数中获得强信号峰特征，序列中的每个氨基酸都被正确识别。

基于质谱的技术可用于对所有类型的抗体进行测序，无论是IgA、IgM、IgG、IgY、Fab、ScFv等，来自除人类之外的所有类型的动物物种，包括小鼠、大鼠、兔和仓鼠。它甚至被用来对污染的或结合的抗体或具有不同轻链的抗体进行测序。

这项技术的目的是完善质谱蛋白质测序。这导致不断努力生产优化的工作流程和软件，使每种蛋白质的测序，无论有多困难，以及保持最高的质量标准成为可能。

这种抗体从头测序的使用经常导致检测到蛋白质分子测序中意外的差异或新的糖基化位点，这不是DNA测序所能发现的。

用于从头抗体测序的质谱方法对于仅一个或数百个抗体分子等待测序是有用的。

在典型情况下，该技术需要0.2 mg或更多纯度至少95 %的单克隆抗体。在分析之后，交付品包括给出重链和轻链的完整序列的详细报告、支持结果的相关数据以及任何其他有用的评论，例如观察抗体的意外变异。所需时间通常是从收到样品起1 - 2周。

在该技术中，编码杂交瘤细胞系可变重和可变轻( VH和VL )结构域的cDNA被测序。这是一项成熟的技术，并且是最具成本效益的，只要分泌感兴趣抗体的细胞系可用。

这项技术已有多年的历史，如果蛋白质长度小于或等于50个氨基酸，可以直接用于序列测定。它只处理低吞吐量。

这些工具与质谱测定抗体的序列不相同，但可以确认抗体蛋白的测定序列的准确性。完整质量分析告诉我们蛋白质分子量是否与蛋白质水平上的实验观察一致。肽图谱帮助我们了解前体肽是否如预期的那样。然而，这些技术在它们的范围内是有限的，并且不能检测单个氨基酸本身，这就是为什么它们本身在测序中没有用处。

rapid Novor公司是全球抗体蛋白测序技术的领导者。该团队专门从事质谱蛋白质组学领域，开发了无需进入生产细胞系即可直接测序抗体蛋白的技术。

作为滑铁卢大学的副产品，该公司正根据联合创始人兼首席科学家马斌博士二十年的科学研究和发明，建立其技术组合。该公司的REmAb抗体蛋白测序服务允许在常规基础上对任何给定抗体蛋白进行精确测序。该公司的野生服务是第一个商业服务，可以准确区分异构异亮氨酸和亮氨酸使用质谱。