邻苯二甲酸丁苄酯注意事项及原理2018-11-23

Anti-RNASE4抗体，血管生成素核糖核酸酶4抗体

免疫组化实验是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。

显色反应（注：二抗一般有两种常用标记酶，HRP和AP，其相对应的显色底物试剂盒为DAB和BCIP/NBT，裂解液一般用发光法。）

HRP标记二抗显色， 用DAB KIT（KPL LOT NO YM107 CAT：54-10-00）显色，按顺序依次加Tris Buffer 3滴，DAB Substrate 3滴,Peroxide solution 2滴于5ml蒸馏水中，避光，混匀，将膜加入显色液中避光显色15 min左右终止反应，记录实验结果，将NC膜晾干扫描保存。

AKP标记二抗显色，用AKP缓冲液洗膜5min，弃去AP缓冲液，加入显色液（66µlNBT溶液同10mlAKP缓冲液充分混合均匀后加入33µl BCIP溶液1h内使用），室温下显色（37℃可加速反应），显色反应通常在30min内可完成。用20mM EDTA/TBS洗膜终止反应,记录实验结果，将NC膜晾干扫描保存。反应溶液可预先配置，可在4℃储存一年以上。
ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法
1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。