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人源细胞系常规培养操作说明2022-01-13

人源细胞系常规培养传代流程:

   人源细胞系作为体外模型而被广泛应用于生物医学研究。正确数据的获得常依赖于细胞系的特性,尤其是当它用来替代其来源者的组织时。

  人源细胞系常规培养传代流程:

  (1)吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间,通常控制在1-2min)

  (2)注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存

  (3)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养

  (4)镜下观察消化情况,在HS505.T人淋巴结成纤维样细胞生长特性边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散。

  人源细胞系的培养注意事项:

  1.传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染,所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材,培养用液应严格分开。

  2.每天观察细胞形态,掌握好细胞是否健康的标准:健康细胞的形态饱满,折光性好,生长致密时即可传代。

  3.如发现细胞有污染迹象,应立即采取措施,一般应弃置污染的细胞,如果必须挽救,可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗,随后培养基中加入较大量的抗菌素,并经常更换培养基等。

 

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