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ELISA试验使用的酶标板分类情况2022-11-16

ELISA是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验的标准程序,通常是把蛋白、抗体、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗体(capture Ab)固定在固相载体上,再加入一级检测抗体(primarydetection Ab),形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶(enzyme)标记了,即可用来直接测定抗原的量,若无,则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质(substrate),作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系,依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度。根据ELISA试剂盒不同的分类标准,酶标板有着不同的分类。

1、根据孔数,ELISA试剂盒酶标板关键分类酶标板关键分类可分为96孔、48孔等,由于酶标板首要是协作酶标仪用,现在市面上的酶标仪有48孔和96孔,但酶标板常用的是96孔。

2、根据其底部的不同,又分为平底的,U型底、V型底等。平底的折射率低,适于在酶标仪检测;U型底的酶标板折射率较高,便当加样、吸样、混匀等操作,可以不用放在酶标仪上,直接通过目测调查色彩改动状况,然后断定有无相应的免疫反应。V底的酶标板可以的汲取样品。

3、根据酶标板与蛋白和其它分子结合才干的不同,又分为高结合力、中结合力和氨基化等。

1)、高结合力

此种酶标板,表面经处理后,其蛋白结合才干大大增强,可达300~400ng IgG/cm2,首要结合的蛋白分子量>10kD。运用该类酶标板可进步敏感性,并可相对减少包被蛋白的浓度和用量,不足之处为较易发生非特异性反应。抗原或抗体包被后,以非离子去污剂无法有效地封闭未结合蛋白的部位,需运用蛋白作为封闭剂。

(2)中结合力

此类酶标板经表面疏水键与蛋白结合,适宜作为分子量>20kD的大分子蛋白的固相载体,其蛋白结合才干为200~300ng IgG/cm2。由于该类酶标板所具有的仅与大分子结合的特性,适用于作为未纯化抗体或抗原的固相载体,可下降潜在的非特异性穿插反应。该类板可以慵懒蛋白或非离子去污剂作为封闭液。

ELISA试剂盒实验

(3)氨基化

ELISA试剂盒这种酶标板经表面改性处理后具有带正电荷的氨基,其疏水键由亲水键代替。该类酶标板适宜作为小分子蛋白的固相载体。运用适宜的缓冲液和pH值,其表面可通过离子键与带负电荷的小分子结合。由于其表面的亲水特性和可通过其它交联剂共价结合的才干,可用于固定溶于Triton-100、Tween 20等去污剂的蛋白分子。该类板的缺陷为由于下降了疏水性,一部分蛋白分子无法结合;此外,其表面需有效地封闭。由于亲水和共价的表面特性,运用的封闭液有必要可以与非反应性氨基基团和所挑选的交联剂中任何功用基团发生作用。

4、根据色彩可分为透明、黑色、白色。

透明的是常用的,用于一般的酶联免疫实验。相对于透明的的酶标板,还有用于发光检测用的不透明的酶标板,一般有黑色和白色两种。黑色的酶标板本身会有光吸收,所以它的信号相对于白色酶标板要低许多,因而一般用于检测较强的光,如荧光检测。而白色的酶标板就用于较弱的光检测,常用于一般的化学发光。其他黑色的酶标板还可以消弱非特异反应带来的问题。一同需求留意的是,用一般的酶标板不可以进行发光检测,由于一般从化学发光反应中发射出的光是各向同性,如果用透明的酶标板,光不只会从笔直方向发散,还会从水平方向发散,使得光极易通过各个孔之间的空地和孔壁,然后导致各孔的光吸收值遭到相邻孔发射光的影响。

综上所述,下面为酶标板分类情况

  1. 酶标板为96孔,分为可拆卸与不可拆卸,灵活适应不同的操作。
  2. 酶标板分为透明、白色、黑色三种类型,分别用于酶联免疫实验与化学发光实验。
  3. 酶标板每个孔底部厚度相近,吸光度也相近,尽量减少实验的误差。避光性好,大程度减少孔与孔之间的信号干扰。
  4. 酶标板拥有与蛋白和其它分子的结合能力,根据结合能力的不同分为高结合力、中结合力和氨基化。
  5. 酶标板需要尽量降低实验误差,制作要求高,价格也相对较高。
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