正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定原理：
碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm处吸收峰最强。
测定操作：
1. 分光光度计预热30min，调节波长到562 nm，蒸馏水调零。
2. 工作液置于60℃水浴预热30 min。
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空白管 |
标准管 |
测定管 |
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蒸馏水（μL） |
20 |
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标准品（μL） |
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20 |
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待测液（μL） |
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20 |
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工作液（μL） |
1000 |
1000 |
1000 |
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混匀后置于60℃保温30min，于1mL比色皿在562nm处测定吸光值A，分别记为A空白管、A标准管、A测定。 |
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注意：空白管和标准管只需要做一次。
计算公式:
Cpr (mg/mL) = C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）
= 0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）
Cpr (mg/g)= C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）÷ W
= 0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）÷ W
W: 样本质量，g
注意事项：
BCA法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在20-5000μg/ml样品。测定前取1-2个样做预实验，若A测定管－A空白管﹥1.5，需将样本用提取液稀释后再测定，以确保测定的准确性。
