在ELISA试剂盒中运用的抗体可分为多克隆抗体（多抗）和单克隆抗体（单抗）。
多抗取白免疫动物的抗血清，制备较简略，但抗血清成分凌乱，除含针对抗原（多个表位）的抗体外，还含有多种其他抗体，亲和力和特异性相对要低于单抗，且制备周期长，批间差异较大。而单抗仅针对抗体的单一表位，ELISA试剂盒亲和力和特异性均较多抗高，且制备技能老练，产量大，批间差异小，但结合位点的单一也正是其缺陷之地址，在双抗体夹心法中，如包被和指示抗体运用同一单抗，则由于结合位点的短少，简略构成假阴．性成果。在运用双单抗一步法时，应留意抗原过剩时的“钩状效应"。
在ELISA试剂盒中运用的抗原要求有较高的特异性、亲和力和纯度。主要有3类，即天然抗原、人工组成抗原和基因重组抗原。
1、天然抗原的纯度不高，特异性不强；
2、组成抗原一般为多肽片段，短少天然抗原所具有的立体结构表位，亲和力不高，可能导致相应表位的抗体漏检；
3、基因重组抗原具有安全、特异性强、亲和力高、产量大等特征，是一种比较志向，但其纯化比较困难。
