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一抗选择具体参照事项2022-12-19

一抗要针对你的目的蛋白选择特异性很强的相应抗体,一般选择抗体说明书上说专门针对WB使用的抗体,而且一般应选择效价较高的抗体。具体选择参照事项如下:

1. 确定抗体的名字。

注意中英文名字、它名、亚型等信息。

2. 确定你的实验类型。

Elisa,WB,IHC,ICC,还是FACS。一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证过适用于何种实验的类型,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种实验验证,请根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的抗体。

3. 确定实验样本的种属。

Human,Mouse,还是Rat。一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种实验,请根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。

4. 样本蛋白的结构性质。

了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体,待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性,蛋白空间构象的改变,会影响抗体的免疫亲和反应。

5.单多克隆抗体的选择。

市面上的抗体还是以多克隆抗体为主,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。

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